材质设计

目前市场上流行的产品主要是采用塑料培养皿，底部设计有开孔（直径为2-15mm），并通过粘合017mm厚度的盖玻片来满足共聚焦物镜校正环的要求，观察区域则为玻璃材质。

细胞贴壁难题

由于玻璃表面的疏水性，细胞往往难以有效贴附，且在成像过程中容易脱落。为此，表面包被的必要性显得尤为重要。

必要性包被

为了增强细胞的黏附力，可以通过蛋白涂层（如Poly-L-Lysine）对玻璃表面进行修饰。此外，直接选用预包被或亲水改性的共聚焦专用培养皿也是一种可行的替代方案。

试剂选择

常用的包被试剂包括：Poly-L-Lysine（PLL）、胶原蛋白和纤连蛋白。其浓度需要依据细胞类型进行预实验梯度测试，推荐浓度范围为05-10μg/cm²。

以PLL为例，稀释原液时，可用超纯水将100μg/ml的PLL原液按1:5比例稀释至20μg/ml。通过向35mm培养皿中加入400μl的稀释液，确保覆盖整个观测区域。

孵育及清洗步骤

在室温下进行1-2小时的孵育后，吸弃多余液体，并用PBS或无血清培养基清洗3次，确保玻璃表面无残留，最后彻底吸干。这一过程必须在超净台上完成，以避免外源污染的引入。

细胞接种与梯度测试

在细胞接种时，需直接将细胞悬液加入培养皿中，避免干燥现象。同时，首次使用时应设置浓度梯度（如05/2/5μg/cm²），以筛选出最佳的贴壁条件。

应避免暴露于光下，清洗后应立即接种细胞，以防止玻璃表面的二次疏水化。

光学兼容性与表面处理

玻璃底部的厚度应控制在≤02mm，透光率需达到90%，以匹配共聚焦物镜的NA值。表面处理方面，可采用等离子亲水涂层或化学改性，确保接触角小于30°。

气体透过性

培养皿的CO₂扩散速率需接近标准培养皿，以维持培养环境的pH稳定性，用于细胞培养中尤为重要。

传统方案与革新方案

传统方案采用玻璃底培养皿与定制化包被，适合对光学精度要求极高的实验（如TIRF显微术）。而尊龙凯时推荐的革新方案是免包被的亲水培养皿，适用于常规共聚焦检测，有效节省时间，同时降低污染风险。

成本平衡

对于频繁实验，建议进行批量采购免包被培养皿；而在处理特殊细胞或高分辨率需求时，仍建议优先选择包被方案。通过选择尊龙凯时的优质产品，助力您的实验效率与成果。