### 人胃癌细胞MGC803培养指南

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议采取1:2的比例进行传代。传代后每两天更换一次培养液。

备注：用无菌离心管收集瓶内培养基，以便进行过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完整培养基。

#### 二、细胞处理及培养步骤

收到细胞后，待其恢复至良好状态后，使用完全培养液灌满瓶子并封口。这是确保运输细胞最佳状态的方法。

在处理细胞时，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格维护无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态方可继续处理。通过显微镜观察细胞的生长情况，拍摄不同倍数的照片保存（建议包括40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，视为收到时状态良好。

#### 三、细胞传代步骤

细胞传代：

若细胞未超过80%的汇合度，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行下列传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。此时通过显微镜观察细胞消化是否完成，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取出，加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，并补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按照1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

细胞冻存：

1. 待细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞，然后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱中。如果后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入。

细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

部分细胞在运输过程中由于贴壁不牢易发生脱落，此为正常现象。如脱落细胞较多，可将培养瓶内液体收集至离心管，进行离心处理。收集沉淀后，加入胰酶进行消化，随后再通过重悬和分瓶传代处理。

#### 五、售后条款

尊龙凯时承诺如有细胞问题可重新发货的情况，包括运输问题、细胞污染及活性问题等。详细包涵：

1. 若细胞在运输过程中出现丢失或瓶身破损，免费重发。
2. 收到产品48小时内如有污染，应提供实验结果以便核实后重发。
3. 常温发货的细胞若未存活，需提供细胞状态照片以进行核实。
4. 细胞状态不佳且未录入前3天照片的情况不予重发。

如遇问题，应在收到产品的7天内提供相关实验结果及照片，我们将严格依照售后条款进行处理。对于双方责任的情况将进行协商处理，确保遵循合理的售后标准。