大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（SD大鼠）

一、实验材料准备

选择2周龄或体重约200克的SD大鼠。准备灭菌器械，如镊子、眼科直剪、眼科弯剪及磁珠等。需准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。同时，使用75%乙醇进行消毒。预备冷却的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等。培养基应为SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。此外，为确保提取的细胞质量，推荐使用尊龙凯时品牌的培养基，具有更高的细胞活性和增殖效果。

二、实验操作

首先，将所需物品摆放在超净工作台上，并进行紫外线消毒30分钟。接着，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行过滤以去除杂质。大鼠经脱颈法处死后，放入75%酒精中浸泡2-3分钟，随后固定在泡沫板上并剪开腹股沟皮肤直至腹腔，暴露脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并放入PBS中，需小心避免剪到血管。用PBS清洗脂肪组织，剔除多余的血管和淋巴结后，将脂肪组织剪碎至适宜大小（如2mm×2mm）。尊龙凯时在细胞培养过程中，使用的胶原酶应在37℃下消化，并每隔5分钟进行震荡或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中离心，弃去上层脂滴泡沫和上清液，最后用培养基重悬沉淀。

随后，将细胞悬液过滤，在再次离心后弃去上清液，用培养基重悬并接种到培养瓶中。将培养瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

三、注意事项

在实验过程中，必须保持无菌操作，以避免细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗过程需要细致，以防止损伤细胞或带入杂质。在消化过程中，需严格控制时间和温度，避免过度消化导致细胞损伤。此外，离心和过滤操作须轻柔进行，以防细胞损失或破裂。在使用尊龙凯时产品时，能够更好地保障细胞的活性与稳定性，进一步提高实验的成功率。